抗体测评(WB)|HIF-1α与PDK1抗体测评:特异性、灵敏度、性价比一次说清

HIF-1α信号通路抗体

HIF-1α信号通路在胚胎发育、细胞增殖、干细胞维持及肿瘤发生中发挥核心调控作用。该通路的关键抗体如HIF-1α、PDK1、GLUT1 等是相关研究中的常用工具。然而，研究者在实际WB实验中常面临以下共性挑战：

分子量多样性：通路中不同蛋白分子量跨度大（如HIF-1α ~93-120 kDa，PDK1 ~49-58 kDa，GLUT1 ~45-55 kDa），单一电泳条件难以兼顾。

翻译后修饰干扰：羟基化（如P402/P564位点）、磷酸化或泛素化修饰易导致条带迁移异常或出现多条带。

丰度差异显著：总蛋白与活化/入核形式丰度差异大，低丰度效应蛋白（如PDK1）检出困难。

非特异性条带：部分抗体与家族同源蛋白（如HIF-2α vs HIF-1α）或骨架蛋白交叉反应。

对比品牌:

主流品牌：Abcam、CST

国产品牌：优品生物

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实验方案优化建议（针对HIF-1α经典激活通路WB痛点）

使用RIPA（含SDS）强裂解液提取总蛋白，如需检测核内HIF-1α，建议使用核蛋白提取试剂盒。

必须添加磷酸酶抑制剂（PhosSTOP）和蛋白酶抑制剂，防止去磷酸化引起的分子量变化。

HIF-1α（93-120kDa）可使用8-10% SDS-PAGE，100V恒压电泳120分钟。

• PDK1（49-58kDa）推荐10%凝胶。

• 如需同时检测总HIF-1α与活化形式（非羟基化），建议使用梯度凝胶（4-12%）改善分离效果。

推荐稀释比：HIF-1α (1:1000)、PDK1 (1:1000)，5% BSA封闭，4℃过夜孵育。

若HIF-1α出现多条带，可能为羟基化或磷酸化修饰，建议使用λ磷酸酶处理样本验证。

若PDK1出现非特异性条带，建议更换封闭液（改用脱脂奶粉）或提高一抗稀释比。

案例1（肿瘤发生研究，HIF-1α检测）

案例2（代谢研究，多指标联合）

优品生物HIF-1α信号通路抗体系列（覆盖总蛋白、活化形式及下游效应分子）均通过KO细胞验证+多批次测试+低丰度检出的专项验证体系。我们不仅提供单抗体，还可定制通路多指标WB检测方案。欢迎提交您的样本进行免费试用或个性化测评需求。